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      二氧化碳培養箱無污染控制技術
      點擊次數:694 發布時間:2022-12-01
        二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境如穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。 廣泛應用于細胞、組織培養和某些特殊微生物的培養,常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產、培養雜交瘤細胞生產抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領域。
       
        在生物活體內,生物體有自身的免疫系統保護細胞或組織,但是在體外培養時,沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養箱的基本參數溫度、CO2 和濕度,大多數培養箱都能滿足研究實驗的需要。然而,針對培養過程中面臨的各種污染源,各品牌二氧培養箱的控制方式和效果不盡相同,因此細胞體外培養中*的威脅實際上是污染問題。
       
        二氧化碳培養箱中的主要污染源:細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。
       
        對于細胞來說,理想的培養環境同樣也適合這些污染物的生存,培養箱本身是不會辨別的,而細胞培養中大部分時間里細胞都是位于培養箱內,因此箱體內能否抑菌或滅菌關鍵!
       
        細菌:細菌污染后,培養基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離,滅菌后丟棄,還要用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺。
       
        病毒:由于病毒寄生生存,爆發后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,相對來說容易處理,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
       
        真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法,包括現在常用的兩性霉素,一旦污染容易反復爆發,尤其孢子很難殺滅。
       
        支原體:支原體污染后,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養基一般不發生渾濁,細胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞已經受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,抑制細胞生長等,往往被大多數實驗者忽視。
       
        非同種細胞:即細胞交叉污染,由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。
       
        因此,以上污染一旦發生,細胞*后基本只能丟棄,實驗無法挽救,對于許多取樣困難的實驗損失無法估量!
       
        目前,二氧化碳培養箱的滅菌技術主要有干熱、濕熱、紫外燈照射、消毒劑擦拭等。
       
        高溫干熱空氣滅菌是目前有效的滅菌技術,能消滅所有微生物污染源(包括耐高溫的芽孢桿菌);濕熱滅菌通常用于高壓蒸汽滅菌中,比較少用在CO2培養箱上,濕熱滅菌在常壓下又叫煮沸法,煮沸的水溫一般至少需為100℃,細菌繁殖體煮沸5分鐘被殺死,但芽胞常需煮沸2小時以上才可被殺死;紫外燈照射法的有效性受很多因素影響,如遮擋、時間、強度、照射距離,濕度等,滅菌效果很難保證;消毒劑擦拭法是對表面滅菌的方法,適合于平整的表面如實驗臺面,而箱體內部設計的死角、各種器件因無法擦拭等因素導致滅菌效果也很有限,而且含氯、碘的消毒劑對于不銹鋼有腐蝕作用,不能對不銹鋼箱體進行擦拭滅菌。
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